Processo de Transformação Bacteriana Utilizando Nanotubos de Nitreto de Boro
Descrição
A presente invenção descreve um processo de obtenção de nanotubos de nitreto de boro (BNNT) e um processo para transformação bacteriana empregando nanotubos de nitreto de boro como facilitadores. Mais especificamente, a presente invenção descreve um processo de transformação, por choque térmico, de linhagens competentes de Escherichia coli utilizando nanopartículas de nitreto de boro como sistema de entrega de plasmideos.
Palavras-chave
nanomateriais; transformação bacteriana; produtividade
Problema
Até o presente momento, existem três metodologias que executam a função in vitro, a sonoporação, a eletroporação e o choque término. A sonoporação, ou sonicação celular, é o uso do ultrassom para modificar a permeabilidade da membrana plasmática celular. A exposição prolongada à baixa frequência de ultrassom demonstrou queda na viabilidade celular. Desta forma, empregar essa técnica significa correr este risco. Além do que, torna- se cara já que necessita de um equipamento que emita o som na faixa estabelecida para esta metodologia. A eletroporação utiliza o pulso elétrico de muitos kV cm⁻¹ de amplitude com duração de submicrosegundos. Esta metodologia, permeabiliza temporariamente a membrana celular bacteriana permitindo que moléculas solvatadas como DNA, entrem nas células eletroporadas. Porém, se os impulsos elétricos forem empregados erroneamente ocorrerá à lise celular. Outra metodologia empregada é o choque térmico. O protocolo original desta metodologia envolve um pré-tratamento de E. coli com íons cálcio (Ca²⁺) e íons magnésio (Mg²⁺) a 0ºC. Este tratamento permite a formação dos poros na parede celular bacteriana. O plasmídeo de interesse é adicionado e o posterior choque térmico a 42ºC, permite a internalização do mesmo. Dependendo do plasmídeo a ser inserido, a taxa de transformação é baixa, pois a parede não fica permeável o suficiente para a entrada do mesmo.
Diferenciais
A presente invenção torna-se útil na rotina de biologia molecular, uma vez que aumenta a taxa de transformação bacteriana pelo processo de choque térmico. O processo é simples e de baixo custo. Além disso, apresenta fácil manipulação, já que não precisa de uma fonte externa de elétrons. Ainda, vantajosamente, é eficiente, triplicando o número de transformantes em relação aos processos usuais de transformação química.
Aplicação
Biologia molecular
Situação
Patente Concedida
Patente
PI 1104516-7
Inventores
MARCELO LANCELLOTTI
LUCIANA MARIA DE HOLLANDA
EDÉSIA MARTINS BARROS DE SOUSA
TIAGO HILÁRIO FERREIRA